RELP بررسی قطعات محدود شونده

در زیست شناسی مولکولی ، چندریختی طولی قطعات بریده شده ( RFLP ) روشی است که از اندازه گیری تنوع در توالی DNA همولوگ ، معروف به پلی مورفیسم ، استفاده می کند تا تنوع افراد ، جمعیت ها یا گونه ها را تشخیص دهد و یا مکانهای ژن را در یک توالی مشخص کند. این اصطلاح باید به خود پلی مورفیسم اطلاق شود ، چنانچه از طریق تفاوت مکان های شناسایی شده ی (detected) قطعات (site) بریده شده با آنزیم محدود کننده ، یا روش های آزمایشگاهی مرتبط چنین تفاوتهایی را می توان نشان داد. در آنالیز RFLP، یک نمونه DNA به یک یا چند قطعه توسط آنزیم های محدود بریده می شود ، و قطعات بریده شده توسط ژل الکتروفورز با توجه به اندازه آنها جدا می شود.

اگرچه اکنون RFLP به دلیل وجود فناوریهای توالی یابی DNA ارزان قیمت ، منسوخ شده است ، تجزیه و تحلیل RFLP اولین تکنیک profiling DNA است که به اندازه کافی برای دیدن کاربرد های گستده تر ارزان قیمت بود. تجزیه و تحلیل RFLP یک ابزار مهم در نگاشت ژنوم (genome mapping) ، مکان یابی ژن ها برای اختلالات ژنتیکی ، تعیین خطر ابتلا به بیماری و آزمایش اطمینان پدر بودن، بود.

تجزیه و تحلیل RFLP[ویرایش]

تکنیک اصلی برای تشخیص RFLP ها شامل تکه تکه کردن یک نمونه از DNA با استفاده از آنزیم محدود کننده است ، که می تواند به صورت انتخابی یک مولکول DNA را از هرکجا که یک توالی کوتاه و خاص وجود دارد طی یک فرایند که به عنوان هضم شناخته می شود ، شکاف دهد. قطعات DNA تولید شده توسط هضم را از طریق فرایندی که به عنوان الکتروفورز ژل آگارز شناخته می شود از هم جدا کرده و از طریق روش ساترن بلات به غشایی منتقل می شوند. غشاء با هیبریداسیون با یک پروب DNA برچسب زده می شود، و سپس طول قطعاتی که مکمل پروب هستند را تعیین می کنند. گفته می شود RFLP زمانی رخ می دهد که طول یک قطعه شناسایی شده بین افراد متفاوت باشد و این نشانگر چندریختی(polymorphism) توالی همسان است. هر قطعه با طول متفاوت یک آلل در نظر گرفته می شود ، چه واقعاً حاوی یک منطقه کد کننده باشد یا نباشد ، که می تواند در آنالیز ژنتیکی بعدی استفاده شود.

شماتیک برای RFLP با از بین رفتن سایت برش آنزیمی (مانند تغییر گلوتامین به والین در کم خونی داسی شکل) ^[۱]

مثال ها[ویرایش]

برنامه[ویرایش]

تجزیه و تحلیل تغییرات RFLP در ژنوم قبلاً ابزاری حیاتی در نقشه برداری ژنوم و آنالیز بیماری ژنتیکی بود. اگر محققان در تلاش بودند تا ابتدا موقعیت کروموزومی ژن بیماری خاص را تعیین کنند ، آنها بابد DNA اعضای یک خانواده مبتلا به این بیماری را تجزیه و تحلیل می کردند و به دنبال آلل های RFLP می گشتند تا الگوی مشابهی از وراثت را مانند بیماری نشان می دهند (مراجعه کنید. ارتباط ژنتیکی ). هنگامی که ژن یک بیماری مکان یابی شد ، از آن به بعد با تجزیه و تحلیل RFLP در خانواده های دیگر می تواند نشان داد چه کسی در معرض خطر این بیماری است ، یا چه کسی احتمالاً ناقل ژن های جهش یافته است. آزمایش RFLP در شناسایی و تمایز موجودات از طریق تجزیه و تحلیل الگوهای منحصر به فرد در ژنوم استفاده می شود. همچنین در شناسایی میزان نوترکیبی در محل های بین قطغات محدود شونده استفاده کرد.